• الأنواع المختلفة من أجهزة تفاعل البلمرة المتسلسل
من أجل دراسة أو اكتشاف الجينات أو مناطق الحمض النووي المحددة أو الطفرات ذات الأهمية غالبا ما يكون من الضروري الحصول على كمية كبيرة من الحمض النووي لدراسته. بدلا من عزل نسخة واحدة من الحمض النووي المستهدف من عدد كبير من الخلايا غالبا ما يكون من المفيد إنشاء نسخ متعددة من جزئ واحد من الحمض النووي عبر طريقة النسخ في المختبر. حيث يعتبر «تفاعل البلمرة المتسلسل - PCR» هو أسلوب بسيط نسبيا ومستخدم على نطاق واسع في البيولوجيا الجزيئية للنسخ والكشف عن تسلسل الحمض النووي مقارنة بالطرق التقليدية لاستنساخ الحمض النووي والتي يمكن أن تستغرق أياما بينما يتطلب تفاعل البلمرة المتسلسل بضع ساعات فقط.
وقد سبق وتناولنا تفاعل البلمرة المتسلسل بشيء من التفصيل في مقال سابق، ولكن هناك عدة أنواع أخرى تُعطي ميزات إضافية في عمليات النسخ على سبيل المثال «RT-PCR» أو ما يعرف باسم النسخ العكسي باستخدام RNA كقالب. وتعتبر هذه خطوة إضافية تسمح باكتشاف ونسخ جُزيئات RNA. حيث يتم نسخ الحمض النووي الريبي عكسيا إلى الحمض النووي التكميلي cDNA باستخدام النسخ العكسي. تعد جودة ونقاء قالب RNA ضرورية لنجاح تفاعل في «RT-PCR»، فالخطوة الأولى من هي تخليق هجين DNA/RNA حيث تتمتع إمكانية تحويل الحمض النووي الريبي إلى cDNA بواسطة RT-PCR بالعديد من المزايا، حيث ان الحمض النووي الريبي مُفرد الشريط وغير مستقر للغاية مما يجعل من الصعب التعامل معه. كذلك يستخدم PCR الكمي «qPCR» لاكتشاف وتوصيف وقياس الأحماض النووية للعديد من التطبيقات. بشكل عام في RT-qPCR يتم قياس تسلسل RNA عن طريق نسخها العكسي إلى cDNA أولاً ثم يتم تنفيذ qPCR لاحقًا.
ففي qPCR يسمح وضع العلامات الفلورية «الصبغات» بالقياس الكمي لجزيئات الحمض النووي التي يتم نسخها عن طريق استخدام صبغة ترتبط «حمض نووي مزدوج الشريط - dsDNA» وخلال كل دورة يتم قياس شدة التلون. تزداد شدة التلون بشكل متناسب مع كمية الحمض النووي المنسوخ وبالتالي يتم قياس الحمض النووي في «الوقت الحقيقي – Real Time». تتمثل عيوب qPCR المعتمدة على استخدام الصبغات في أنه يمكن فحص هدف واحد فقط في كل مرة وأن الصبغة سترتبط بأي حمض نووي مزدوج الشريط موجود في العينة. جميع الأنواع المختلفة مبنية بشكل أساسي على تفاعل البلمرة المتسلسل الأساسي لذا يجب الاطلاع ومعرفة كيف يعمل وأهم المميزات التي توجد به للتمكن من فهم بقية الأنواع المختلفة الأخرى.
الكاتب: فاطمة سيد
